Microscopia óptica y métodos de tinción

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La histología es el estudio de los tejidos y órganos mediante la microscopia. Al igual que la frase "la forma sigue a la función", las estructuras de los tejidos humanos están estrechamente relacionadas con sus funciones.
Al integrar la histología con otras disciplinas, como la bioquímica, la biología celular y la fisiología, es posible comprender mucho mejor el funcionamiento del organismo.
Aunque hay muchos tipos de microscopia, la microscopia óptica o MO es la más común, en gran medida por lo práctica que resulta tanto en el ámbito clínico como en la investigación.
Otros tipos de microscopia son la sonda de barrido, la ultravioleta, la virtual y la microscopia electrónica o ME La microscopia óptica puede subdividirse en función de la técnica específica que se utilice, como la microscopia de campo claro, la de inmunofluorescencia y la de campo oscuro.
Nos centraremos principalmente en la microscopia de campo claro y en algunos de los diversos métodos de tinción que la acompañan.
La microscopia de campo claro no solo es el tipo más sencillo de microscopia óptica, sino también el tipo con el que la mayoría de la gente está familiarizada, ya que utiliza la luz ordinaria para examinar el tejido teñido a gran aumento.
Para poder visualizar el tejido, primero hay que prepararlo adecuadamente. El método más común de preparación de tejidos sigue tres pasos prin ipales.
El primero consiste en fijar o preservar el tejido mediante formalina. El siguiente paso es el procesamiento del tejido, que es el que elimina el agua del tejido.
Para ello se utiliza etanol, que sustituye el agua de todas las células, y xileno, que elimina el etanol disolviéndolo, lo que facilita la incrustación del tejido en parafina.
El tercer paso consiste en incrustar el tejido en cera de parafina, que elimina el xileno del tejido y también se solidifica en un "bloque de parafina" que facilita la sección o el corte del tejido en rodajas muy finas.
Para ello se utiliza una máquina llamada micrótomo, que la mayoría de los laboratorios utilizan para cortar el bloque de parafina en rodajas de 4 μm de grosor.
A continuación, se monta el corte de parafina en un portaobjetos de vidrio y se tiñe el tejido para facilitar su visualización al microscopio.
La tinción más común es la combinación de hematoxilina y eosina, abreviada como HyE. Esta imagen de un conducto pancreático se tiñó con HyE y la imagen de la derecha, solo con hema oxilina.
La hematoxilina es un colorante básico con carga positiva y teñirá las estructuras con carga negativa de color púrpura o azul oscuro.
Debido a esta característica, los componentes tisulares que se tiñen fuertemente con colorantes básicos suelen denominarse estructuras basófilas.
Los núcleos, los ribosomas y el retículo endoplásmico rugoso son estructuras basófilas debido a la carga negativa del ADN y el ARN que contien n.
La matriz del cartílago también es una estructura basófila común. Por otro lado, la eosina es un colorante ácido con carga negativa que tiñe de rojo o rosa las estructuras con carga positiva o eosinófilas.
Algunas de las estructuras comúnmente eosinófilas incluyen colágeno, proteínas citoplásmicas y mitocondrias. Las mitocondrias son especialmente eosinófilas y se tiñen fuertemente de eosina, para dar a las células con muchas mitocondrias, como las musculares cardíacas, una coloración rosa oscuro.
Como es de esperar, se pueden utilizar otras tinciones para ayudar a visualizar y examinar estructuras específicas que podrían no verse tan fácilmente con HyE.
La tinción de ácido periódico-Schiff o PAS también se utiliza habitualmente. Esta tinción colorea los hidratos de carbono complejos de un color rojo oscuro o magenta, por lo que es útil para identificar el glucógeno en células como los hepatocitos y las células musculares.
En esta imagen de hepatocitos, el tejido se tiñó con PAS y se le aplicó contratinción con h matoxilina. Así es posible ver el glucógeno de color magenta oscuro, además de los núcleos de los hepatocitos, que se tiñen de color púrpura con la hematoxilina.
Los azúcares que se encuentran en el moco también se tiñen bien con el PAS, como el moco que recubre el estómago, que se tiñe intensamente de magenta oscuro en esta imagen.
La tinción PAS también tiñe el tejido conjuntivo y las membranas basales, como la membrana basal glomerular y la membrana basal de la cápsula de Bowman que se encuentran en los riñones.
Esta sección se tomó del intestino delgado y se tiñó con tricrómico de Masson. Esta tinción se utiliza para visualizar mejor el tejido de soporte, especialmente el colágeno.
Con el tricrómico de Masson, el tejido conjuntivo se tiñe de azul, como puede apreciarse claramente en la submucosa del intestino delgado.
Si nos acercamos, veremos que los núcleos se tiñen de rojo oscuro o púrpura, y el citoplasma lo hace de rojo o rosa. La queratina, los eritrocitos y los músculos también se tiñen de rojo o rosa.
Con este aumento puede verse también la lámina propia en azul, que es el tejido conjuntivo que sostiene el epitelio. El azul alciano tiñe de azul los polisacáridos ácidos, como los que se encuentran en los cartílagos y ciertos tipos de mucina.
Se suele utilizar junto con otras tinciones como HyE o van Gieson. La mucina contenida en las células caliciformes se aprecia fácilmente en esta imagen de la mucosa nasal, aunque la tinción parece casi verde o azul verdoso, porque también se utilizó van Gieson para teñir el tejido, lo que facilita la visualización del tejido que rodea a las células caliciformes.
La tinción de van Gieson se utiliza a menudo para los vasos sanguíneos y la piel. Esta tinción, en particular, puede ser útil para visualizar un aumento anómalo del colágeno o para ayudar a diferenciar el músculo liso del colágeno dentro de una muestra de tejido.
Tiñe el colágeno de rosa; las fibras elásticas de negro; los núcleos de azul, y los eritrocitos, el músculo, el citoplasma y la fibrina, de amarillo.
La tinción de Giemsa es una tinción estándar utilizada para los frotis de sangre y médula ósea Los eritrocitos aparecerán de color rosa pálido; el citoplasma, de color azul pálido, y los núcleos, de color azul oscuro o violeta.
El negro de Sudán y el osmio son tintes que tiñen de marrón o negro las estructuras que contienen lípidos, como la mielina que rodea los nervios y los adipocitos.
Además, esta tinción puede ser útil para diagnosticar enfermedades metabólicas que provocan un aumento del colesterol, los fosfolípidos o los glucolípidos intracelulares.
Clínicamente, las secciones congeladas se utilizan para obtener resultados mucho más rápidos, cuando es necesario. Por ejemplo, durante la intervención quirúrgica, si el cirujano está extirpando un tumor, es posible que tenga que asegurarse de que se ha eliminado todo el tejido no sano haciendo que un patólogo analice rápidamente las muestras de tejido antes de completar la intervención.
Para ello, el margen de la masa extirpada quirúrgicamente se envía al laboratorio de patología, donde la masa se embebe en un compuesto llamado compuesto de temperatura óptima de corte o TOC, para abreviar.
Luego se congela rápidamente en nitrógeno líquido. Así se preservará y endurecerá rápidamente el tejido para que pueda ser seccionado en una máquina llamada crióstato, que es un tipo de micrótomo donde el tejido puede mantenerse a una temperatura inferior a la de congelación.
Los portaobjetos se tiñen normalmente con tinciones de HyE, azul de metileno y/o PAS. Este método se utiliza principalmente debido a su rápido tiempo de respuesta, que puede ser de hasta 10 minutos si lo realiza un patólogo experimentado.
Las secciones congeladas suelen utilizarse únicamente para análisis urgentes, ya que la calidad de los portaobjetos producidos a partir de secciones congeladas no es tan buena como la de los típicos tejidos fijados en formol e incluidos en parafina, que también pueden denominarse secciones permanentes.
Las secciones permanentes pueden tardar entre 12 horas y 2,5 días en completarse, según el tamaño del tejido y el método de tinción utilizado.
Estas imágenes de tejido fibroadiposo necrótico con organismos fúngicos muestran un ejemplo de la posible diferencia de calidad de imagen entre una sección congelada y una sección permanente correspondiente, ambas teñidas con HyE.
##Resumen Como breve resumen... The most common form of light microscopy is bright field microscopy, which most commonly utilizes H&E stains.
úrpura o azul oscuro. n cambio, la eosina tiñe de rojo Se pueden utilizar otras tinciones junto con la HyE para ayudar a visualizar y examinar estructuras específicas que podrían no verse tan fácilmente con la HyE sola.
Si se requiere un análisis urgente de un tejido, se puede recurrir a secciones congeladas para obtener resultados mucho más rápidamente.