ELISA (ensayo inmunoenzimático)

Definitions & Key takeaways

ELISA is a biochemical assay used in immunology to detect the presence of an antigen, antibody, or another protein. It takes its name from the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).

The basic principle behind ELISA is that if an antigen or antibody is present in a sample, it will bind to a specific antibody or antigen attached to a solid support. The bound antigen or antibody can then be detected using an enzyme-linked secondary antibody that recognizes the primary antibody or antigen. The presence of this enzyme can be detected using various methods depending on the assay format, such as spectrophotometry, fluorimetry, or chemiluminescence. ELISA is a very sensitive assay that can detect minute levels of antigens or antibodies in a sample. It is often used to measure the concentration of proteins in body fluids, such as serum or urine.

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El ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (o ELISA, por sus siglas en inglés) es una técnica o ensayo de laboratorio en el que los anticuerpos o antígenos presentes en las muestras de las personas se inmovilizan en una superficie, y luego se detectan mediante un anticuerpo con una enzima adherida que provoca un cambio de color.
Por eso es útil para diagnosticar infecciones, como el VIH, la hepatitis B o la malaria, y enfermedades autoinmunes, como la enfermedad de Graves, el lupus eritematoso sistémico o la artritis reumatoide, en las que el organismo reacciona a sus propias proteínas como si fueran antígenos extraños.
Respuesta inmunitaria. Estamos constantemente rodeados de microorganismos dañinos llamados patógenos, que podrían causar mucho daño si no fuera por el sistema inmunitario.
Estos patógenos tienen partes singulares llamadas antígenos. Los linfocitos B son células del sistema inmunitario que pueden detectar esos antígenos y desencadenar una respuesta inmunitaria segregando grandes cantidades de anticuerpos.
Estos anticuerpos, también llamados inmunoglobulinas o Ig, son proteínas en forma de Y que tienen dos regiones: la región del fragmento constante, también llamada Fc, que determina la clase de anticuerpo (IgD, IgM, IgG, IgA o IgE), y dos regiones de unión fragmento-antígeno, o Fab, que reconocen y se unen al antígeno para inactivarlo, impidiendo que el patógeno llegue a su célula diana y le cause daños.
Principio de ELISA. La idea básica con ELISA es utilizar ese vínculo específico entre el antígeno y el anticuerpo para ayudar a diagnosticar infecciones o enfermedades autoinmunes Más en concreto, ELISA puede utilizarse para buscar los antígenos del patógeno o los anticuerpos que el organismo segrega contra ellos.
Además, los hace visibles o medibles mediante el uso de un anticuerpo contra el antígeno o anticuerpo sosp choso. Pero este anticuerpo viene con un plus: una enzima unida, que puede modificar un sustrato llamado c omógeno.
Cromógeno significa literalmente que genera color, por lo que el cambio de color determina si la prueba es positiva o negativa.
Podría pensarse en una prueba ELISA como en una receta de cocina. Necesitaremos, por tanto, una olla, y algunos ingredientes, o reactivos.
El recipiente de cocción es una placa transparente con 96 pocillos, hecha de un material especial que permite que las proteínas se adhieran fácilmente a su superficie, incluidas las paredes y el fondo de los pocillos.
Se manejan siete reactivos: la muestra de suero del paciente; algunas proteínas inespecíficas, como la albúmina de suero bovino o la caseína, que no interaccionan con ningún otro reactivo sino que solo pueden adherirse a la superficie del pocillo; el anticuerpo ligado a la enzima; el sustrato cromógeno; una solución salina combinada con detergente no iónico que se utiliza para lavar los pocillos entre cada paso del procedimiento; una solución de parada, como el ácido sulfúrico, y dos muestras de control, un control positivo, que es una solución que se sabe que tiene el antígeno o el anticuerpo que se espera encontrar, y un control negativo que no tiene el antígeno o el anticuerpo.
Cabe distinguir tres tipos principales de ELISA: directo, indirecto y en sándwich. Dependiendo del tipo, pueden ser necesarios otros reac ivos.
Así, en el método ELISA se pone un control positivo en uno de los pocillos, un control negativo en otro, y tantas muestras como sean necesarias en el resto de los pocillos.
Se puede colocar una muestra en cada pocillo, por lo que es posible analizar a muchos pacientes con una sola placa ELISA.
Rebobinemos un poco y acerquémonos a uno de los 96 pocillos de la placa para ver cómo funciona todo. ELISA irecto.
Para empezar, veamos el ELISA directo, que se utiliza en la detección de antígenos. En primer lugar, se coloca la muestra de suero en el pocillo y se incuba Durante este tiempo, las proteínas presentes en la muestra, entre ellas el antígeno esperado, se adhieren a la superficie del pocillo.
A continuación, se desecha la solución de muestra sobrante y se lava el pocillo varias veces, para que solo queden en la superficie las proteínas adheridas.
Sin embargo, podrían formarse entre ellas algunos huecos vacíos. Si se dejan estos huecos, el anticuerpo ligado a la enzima, que se añade a continuación, podría unirse a estos sitios pegajosos y dar una reacción de falso positivo.
Así que a continuación se añaden proteínas inespecíficas, que se adhieren a todos los huecos restantes. Tras un período de incubación, se vuelve a lavar el pocillo.
A continuación, se añade la solución con el anticuerpo ligado a la enzima específico del antígeno buscado, se incuba y se vuelve a lavar.
Si el antígeno está presente en la muestra, el anticuerpo ligado a la enzima se une a él y no puede ser eliminado por lavado.
Sin embargo, si el antígeno no está en la muestra, el anticuerpo ligado a la enzima no tiene nada a lo que adherirse, y es arrastrado al lavarlo.
El siguiente paso consiste en añadir el cromógeno e incubar de nuevo, esta vez en un lugar oscuro para que se produzca la reacción.
Transcurrido un cierto tiempo, se retira la placa de la oscuridad y se detiene la reacción con una solución de parada. Si el anticuerpo ligado a la enzima encuentra su antígeno, el cromógeno genera un color, generalmente amarillo, que se traduce en un resultado positivo.
Cuanto más intenso sea el color, mayor será la concentración del antígeno en la mue tra. Si el antígeno no estaba allí, no hay cambio de color, lo que se considera un resultado negativo Para obtener resultados más precisos, la intensidad del color puede medirse por espectrofotometría, con una máquina llamada lector de ELISA, para determinar si el resultado de la prueba es positivo o negativo.
El método ELISA directo es el tipo más sencillo, pero hoy en día el ELISA indirecto y el ELISA en sándwich lo han sustituido en gran medida al ser técnicas más sensibles.
ELISA in irecto. Así, para entender la diferencia entre los métodos ELISA indirecto y en sándwich, supongamos que estamos tratando de diagnosticar una infección por VIH.
Ambas pruebas son apropiadas para la situación, pero la ELISA indirecta puede detectar anticuerpos IgG en el suero dirigidos contra los antígenos del VIH, mientras que la ELISA en sándwich detecta el propio antígeno del VIH.
Básicamente, con el ELISA indirecto hay un antígeno del VIH que se adhiere a la superficie del pocillo; un anticuerpo primario que se une a él, que es el anticuerpo IgG que se busca en el suero, y después el anticuerpo secundario ligado a la enzima.
A continuación se añade el cromógeno; si el anticuerpo IgG estaba presente en el suero, el cromógeno genera color, lo que se traduce en un resultado positivo.
También se puede utilizar un lector de ELISA y los resultados se interpretan de la misma manera que el método ELISA directo.
with a sandwich ELISA test, we can detect HIV antigens pueden detectarse los antígenos del VIH en lugar de los anticuerpos contra esos antígenos.
En este caso se forma básicamente un sándwich de anticuerpo-antígeno: hay un anticuerpo primario que se adhiere a la superficie del pocillo; luego el antígeno del VIH que se une a él, que es el que se busca en el suero, y finalmente el anticuerpo secundario ligado a la enzima.
A continuación se añade el cromógeno: si el antígeno del VIH estaba presente en la muestra de suero, el cromógeno genera color, lo que se traduce en un resultado positivo.
También se puede utilizar un lector de ELISA y los resultados se interpretan de la misma manera que las otras pruebas de ELISA.
right, as a quick recap...Enzyme-linked immunosorbent assay - or ELISA o ELISA, es una técnica de laboratorio utilizada para diagnosticar infecciones y enfermedades autoinmunes Para ello se pueden buscar los antígenos o los anticuerpos contra ellos.
Con el método ELISA directo se pueden detectar antígenos en una muestra mediante el emparejamiento de su correspondiente anticuerpo ligado a la enzima para revelar su presencia.
Mediante el ELISA indirecto se puede utilizar un antígeno adherido al pocillo para seleccionar un anticuerpo específico del antígeno en una muestra, y luego emparejar un anticuerpo secundario ligado a la enzima.
Con el ELISA en sándwich se puede utilizar un anticuerpo adherido al pocillo para seleccionar un antígeno en una muestra, y luego emparejar un anticuerpo secundario ligado a enzimas; como con el ELISA directo, pero más sensible.